Иммунология что такое адъюванты
Иммунология что такое адъюванты
Под иммунологическими адъювантами подразумевают любые вещества, действующие неспецифически и повышающие специфический иммунный ответ на антигены. Поскольку многие вирусные вакцины (особенно компонентные) вызывают слабые иммунные реакции, стали использовать адъюванты, добавление которых дало возможность в различной степени возместить этот недостаток.
Адъюванты функционируют как депо антигена, как иммуностимуляторы, и как иммуномодуляторы или как организаторы антигена в дискретные частицы. Многие адъюванты сочетают комбинированное действие двух и более из этих функций.
Об иммуностимулирующей и иммуномодулирующей функции адъювантов свидетельствует повышение титра антител, возрастание активности Тц- и/или Тх-клеток. Различные цитокины действуют так же как адъюванты.
В 1925 г. Гастон Рамон впервые доказал возможность искусственного повышения активности дифтерийного или столбнячного анатоксинов путем добавления к антигенам различных веществ (агар, тапиока и др.). Он был первым, кто ввел концепцию адъювантов и субстанций, стимулирующих иммунитет, введение которых в организм вместе с вакцинным антигеном повышает уровень иммунитета по сравнению с теми же вакцинами, введенными в чистом виде.
В 1926 г. А. Гленни и другие установили, что алюмопреципитация дифтерийного токсина значительно повышает его антигенные свойства. С тех пор для увеличения антигенности токсоидов применяли преципитацию белков различными металлами, однако наилучший эффект был достигнут с использованием алюминия. Крупный вклад в изучение адъювантов и иммуномодуляторов принадлежит Фрейнду, с именем которого связано введение в иммунологию полных и неполных адъювантов. Однако настоящая эра адъювантов началась с открытия иммуностимулирующих свойств у мурамиловой кислоты, содержащейся в стенке бактерий, и получения синтетического препарата мурамилдипептида (МДП).
Повышенный интерес к адъювантам объясняется рядом причин. Оказалось, что эффективность большинства вакцин можно значительно повысить добавлением к ним множества разнообразных неантигенных веществ. Однако лишь некоторые из них нашли применение при изготовлении вакцин для людей и животных. Такие адъюванты как гидроокись алюминия (ГОА) или фосфат алюминия в течение многих десятилетий применяли для увеличения образования антител против бактериальных токсоидов у людей.
Эти адъюванты, а также сапонин широко использовали с целью повышения иммуногенности различных инактивированных вирусных вакцин для животных. Добавление адъювантов усиливает первичный иммунный ответ. Значение их в последнее время приобрело большой интерес в практической иммунологии. Заметные успехи достигнуты на пути улучшения адъювантов либо путем их фракционирования, либо с помощью химических модификаций. Известно, что некоторые низкомолекулярные растворимые антигены обладают слабой иммуногенностью, поэтому в них необходимо добавлять адъюванты. Проблема адъювантов приобрела особую актуальность в связи с перспективой получения антигенов на основе технологии рекомбинантных ДНК.
Такие антигены, как правило, вызывают образование антител и протективный иммунный ответ только при совместном введении с адъювантами. Необходимость присутствия адъювантов в зависимости от вида антигена приведена в таблице:
АДЪЮВАНТЫ
Адъюванты (латинский adjuvans — помогающий, поддерживающий) — неспецифические стимуляторы иммуногенеза, вещества различного происхождения и состава.
Адъюванты могут обладать антигенными свойствами (убитые микроорганизмы или полисахариды бактериального происхождения) и не обладать ими (минеральные масла, квасцы и так далее). Действие адъювантных стимулирующих веществ отмечено в 1925 году Районом (G. Ramon), установившим активацию продукции антитоксинов (см.) у лошадей при совместном введении анатоксинов (см.) с квасцами, хлористым кальцием, тапиокой, лецитином, холестерином, ланолином, бензоином.
К адъвантам неорганической природы относят гидрат окиси алюминия, фосфат алюминия, фосфат кальция, хлористый кальций, алюминиево-калиевые квасцы, гидрат окиси железа, активированный уголь и другое. Среди органических веществ адъювантным действием обладают агар-агар, глицерин, желатина, крахмал, ланолин, лецитин, пектиновые вещества, протамины и другое. Более сложные адъюванты состоят из смесей масел или липополисахаридов с добавлением эмульгаторов, а также смесей липидов с минеральными сорбентами.
Наиболее тщательно изучено и широко применяется для усиления действия антигенов при изготовлении вакцинных препаратов (см. Вакцины) лишь небольшое количество адъювантных веществ. В качестве сорбентов при изготовлении вакцин чаще всего применяют гидрат окиси алюминия — Аl(ОН)3 и фосфат алюминия — АlPO4. Гидрат окиси алюминия представляет собой минеральный гель, содержащий 6—22 мг Аl(ОН)3 в 1 мл, с хорошими сорбционными свойствами; безвреден для организма. Фосфат алюминия также высокодисперсный препарат.
При изготовлении ассоциированных вакцин используют в качестве адъюванты убитые бактерии.
Разнообразные адъюванты находят применение в производстве лечебных сывороток (см.) и особенно в экспериментальных исследованиях по иммунологии. При этом нередко используют более реактогенные препараты (1% раствор алюминиево-калиевых квасцов, ланолин, холестерин, водно-масляные эмульсии, адъювант Фрейнда). Полный адъювант Фрейнда содержит BCG или липополисахариды, полученные из микобактерий туберкулеза, сложные жирные кислоты (дериваты ланолина), масла и эмульгаторы (Арлацел А или Твин-80). Адъювант Фрейнда, лишенный фракции микобактерий туберкулеза, называют неполным. Он является мощным стимулятором иммуногенеза, но не применяется в профилактической вакцинации в связи с его токсичностью и аллергизирующим действием. Использование адъюванта Фрейнда способствует индукции гиперчувствительности замедленного типа и развитию аутоиммунных процессов (см. Аутоантигены, Аутоантитела).
Выраженным адъювантным действием обладают бактериальные эндотоксины, нуклеиновые кислоты и продукты их распада, синтетические нуклеотиды и полианионы.
Механизм стимулирующего действия адъвантов на организм окончательно не выяснен. Усиление антигенного воздействия зависит прежде всего от развития в организме воспалительного процесса и стимуляции пролиферативной и фагоцитарной активности ретикулоэндотелиальной системы, усиления плазмоклеточной реакции и генерализации иммунологического процесса по лимфоидным органам и резкого увеличения общего синтеза белка. Вероятную роль играет также замедленная резорбция антигена из депо с замедлением разрушения антигена и дискретным действием его на лимфоидную ткань.
Адъюванты широко применяют как стимуляторы иммуногенеза при введении в организм человека и животных специфических антигенов. К последним относятся сорбированные на гидрате окиси алюминия анатоксины, полные антигены и противовирусные вакцины (против клещевого энцефалита, гриппа), а также ассоциированные препараты, напр, адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС). Обычно очищенные антигены сорбируют в определенном соотношении на стандартной суспензии гидрата окиси алюминия, проверяют на иммуногенность и реактогенность, а также учитывают ряд физико-химический констант: рН, содержание сорбента и так далее. (см. Вакцины, Иммунизация).
В 60-х годах пытались использовать в медицинской практике вакцины с адъювантами из минеральных масел. Испытания показали, что эти вакцины более иммуногенны, чем несорбированные, вызывают образование более широкого спектра антител. Однако при их использовании на месте введения иногда образовывались гранулемы, что послужило причиной прекращения их применения.
Для приготовления высокоактивных сывороток от животных, а также для получения гиперчувствительности замедленного типа, кроме полного и неполного адъюванта Фрейнда, успешно используют простые и двойные водно-масляные эмульсии, эмульгированные с раствором антигена до получения стойкой эмульсии. Двойные эмульсии получают при дальнейшем эмульгировании с равным объемом 2% раствора Твина-80 обычно на механическом эмульгаторе.
В фармакологии адъювантами называются вещества, усиливающие или пролонгирующие действие лекарственных средств.
Адъювантная болезнь
Адъювантная болезнь — заболевание у животных, вызываемое введением адъюванта Фрейнда и характеризующееся комплексом воспалительных изменений с преобладанием пролиферативного компонента, локализующихся главным образом в суставах и периартикулярной ткани. Это заболевание имеет сходство с такими заболеваниями человека, как ревматоидный артрит, узловатая эритема и используется как экспериментальная модель для их изучения.
Впервые «адъювантный артрит» был описан Пирсоном (C. M. Pearson, 1956) у крыс в виде острого воспаления в суставах хвоста, стопы и лодыжки с последующим развитием периоститов и экзостозов. Установлено, что воспалительные изменения развиваются не только в суставах, но и в коже, центральной нервной системы, легких, глазах, печени, почках, мочевыводящих путях и многих других органах. Поэтому в 1961 году был предложен термин «адъювантная болезнь», который более соответствует сущности изменений.
Адъювантная болезнь лучше всего воспроизводится у крыс различных линий обоего пола. Установлена зависимость между тяжестью болезни и линейной принадлежностью крыс.
Адъюванты готовят как по классической прописи (минеральное масло, ланолин, вода, в 1 мл которой содержится 3 мл микобактерий туберкулеза, убитых нагреванием), так и в различных вариациях. Вариации касаются состава эмульгатора, замены микобактерий туберкулеза отдельными фракциями из них или другими бактериями. Наиболее эффективный способ воспроизведения адъювантной болезни — однократная инъекция адъюванта в подушечки задних или всех четырех лап животного в дозе 0,05—0,1 мл.
Поражения суставов. Первые признаки воспаления суставов и окружающих тканей появляются через 10—16 дней после введения адъюванта. Суставы опухают, в полости суставов появляется экссудат, развивается периостит. Артриты носят мигрирующий характер и возникают у крыс в 70—100% случаев. Поражаются преимущественно запястно-пястные, межпястные, пястно-фаланговые и плечевые суставы на передних конечностях, а также предплюсне-плюсневые, межплюсневые, пястно-фаланговые и тазобедренные суставы па задних конечностях крыс.
Тяжелые формы артритов имеют тенденцию к затяжному течению, разрушению хрящевой поверхности суставов, развитию соединительной ткани, склероза и анкилоза суставов. В первые дни развития артритов гистологически определяется отечность периартпкулярной соединительной ткани и синовиальных оболочек, инфильтрация их мононуклеарами (моноциты, лимфоциты, гистиоциты), пролиферация фибробластов.
Через 3—4 недели среди клеток инфильтрата преобладают лимфоциты, усиливаются пролиферативные процессы, в костной ткани суставов — гиперплазия остеобластов. У большинства животных артриты заканчиваются выздоровлением с восстановлением подвижности в суставах.
Поражения кожи. Вслед за развитием артритов у крыс могут появляться участки облысения и сыпь в виде папул и бугорков. Гистологически в области небольших бугорков выявляются перивенозные мононуклеарные инфильтраты преимущественно из гистиоцитов и лимфоцитов и более диффузная гиперплазия гистиоцитов без выраженной перивенозной локализации. В больших узлах — массивная клеточная инфильтрация с изолированными фокусами некроза, содержащими материал, похожий на фибрин. Через 1—1,5 месяцев развиваются поздние кожные изменения в виде выпадения волос, шелушения, трещин, которые держатся до 3—4 мес.
Поражения селезенки и лимфатических узлов. В селезенке выявляется гиперплазия клеточных элементов, образование светлых центров в лимфатических фолликулах. Характерна гиперплазия лимфатических узлов, увеличение светлых центров реактивности (размножения) в фолликулах, пролиферация плазматических клеток в мякотных шнурах.
Поражения центральной нервной системы аналогичны тем, которые обнаруживаются при введении адъювантов с гомогенатом ткани спинного мозга и сопровождаются развитием экспериментального аллергического энцефаломиелита. Однако введение одного адъюванта не дает демиелинизацию.
Поражения глаз в виде конъюнктивита, эписклерита, увеита, иридоциклита возникают после развития артрита у небольшой части животных и держатся обычно от 2 до 14 дней. В легких случаях все явления проходят. В тяжелых случаях в передней камере глаза наблюдается скопление фибринозного экссудата, развитие задних синехий и атрофии радужки, образование преципитата на внутренней стороне роговицы и ее помутнение.
Поражения желудочно-кишечного тракта. Резко выраженная диарея отмечается примерно в 20% случаев. Она продолжается от нескольких дней до двух недель.
Поражения печени. Гистологически выявляется пролиферация клеток ретикулоэндотелиальной системы, образование клеточных инфильтратов.
Поражение почек и мочевыводящих путей. Развиваются различные виды нефрита.
Поражения органов и систем у разных видов животных, а также разных органов в пределах одного вида животных в общем однотипны, хотя имеются видовые и органные различия. Так, например, в печени, селезенке и легких мышей, морских свинок и хомяков хорошо выражена пролиферация элементов ретикулоэндотелиальной системы, но она отсутствует в сердце и почках этих животных. Амилоидоз печени, почек и селезенки наблюдается у мышей, но отсутствует у морских свинок и хомяков.
Патогенез
Существует две теории патогенеза адъювантной болезни.
1. Инфекционная теория предполагает активирование эндогенной инфекции (например, у крыс — активирование микробов семейства Mycoplasmataceae, часто обнаруживаемых у практически здоровых животных). Эта теория не получила подтверждения, так как посевы крови, ткани суставов и ткани с места инъекции адъюванта, жидкости из камер глаза оказывались стерильными, а введение больших доз различных антибиотиков не тормозило развития болезни.
2. Аутоаллергическая теория предполагает участие иммунологических механизмов. Эту теорию подтверждают следующие факты: а) латентный период при адъювантной болезни такой же, как при развитии других экспериментальных аутоаллергических процессов, при реинокуляции стимулятора он уменьшается; б) развитие заболевания тормозится воздействиями, угнетающими иммунологическую реактивность, — облучением рентгеновскими лучами в дозе 600 р, введением иммунодепрессантов, в частности 6-меркаптопурина и больших доз глюкокортикоидов, предварительной (за 4—12 нед.) тимэктомией, введением антилимфоцитарной сыворотки; в) воспроизведение адъювантной болезни невозможно у новорожденных и молодых крыс, так как механизмы иммунологической реактивности у них еще не развиты или только формируются; г) характер аутоаллергических механизмов развития болезни указывает на их отношение к реакциям замедленного типа, что подтверждается возможностью пассивного переноса адъювантной болезни взвесью клеток лимфоидного ряда и невозможностью переноса сывороткой крови, а также гистологической картиной тканевых изменений, характерной для реакций замедленного типа, торможением реакции миграции макрофагов, отсутствием снижения титра комплемента во время острого периода болезни; д) возможно воспроизведение феномена иммунологической толерантности (см. Толерантность иммунологическая), то есть подавление развития адъювантной болезни у животных, получивших при рождении микобактерий туберкулеза.
Библиография: Воробьев А. А. и Васильев Н. Н. Адъюванты, М., 1969, библиогр.; Гурвич Г. А. и др. Эндотоксины как неспецифические биостимуляторы антителообразования, Вести. АМН СССР, Л» 8, с. 50, 1964; Здродовский П. Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии, с. 192, М., 1969; Кэбот Е. и Мейер М. Экспериментальная иммунохимия, пер. с англ., с. 316 и др., М., 1968; Рамон Г. Сорок лет исследовательской работы, пер. с франц., с. 235, М., 1962; Учитель И. Я. и Хасман Э. Л. О механизме адъювантного действия неспецифических стимуляторов антителообразования, Вестн. АМН СССР, № 3, с. 23, 1964, библиогр.; Chase М. W. Production of antiserum, в кн.: Methods in immunol. a. immunochem., ed. by C. A. Williams a. M. W. Chase, v. 1, p. 197, N. Y. — L., 1967; Freund J. The mode of action of immunologic adjuvants, Advanc. Tuberc. Res., v. 7, p. 130, 1956; Herbert W. J. Methods for the preparation of water-in-oil, and multiple, emulsions for use as antigen adjuvants, Handbook exp. immunol., ed. by D. M. Weir, p. 1207, Oxford — Edinburgh, 1967, bibliogr.; International symposium on adjuvants of immunity, ed. by R. H. Regamey a. o., Basel — N. Y., 1967; Merritt K. a. Johnson A. G. Studies on the adjuvant action of bacterial endotoxins of antibody formation, J. Immunol., v. 94, p. 416, 1965, bibliogr.; Schmidtke J. R. a. Jоhnsоn A. G. Regulation of the immune system by synthetic polynucleoti-des, ibid., v. 106, p. 1191, 1971, bibliogr.
Адъювантная болезнь — Канчурин А. X., Аскеров М. А. и Лазько И. Е. Адъювантная болезнь, Пат. физиол. и эксперим. тер., т. 13, №2, с. 78, 1969, библиогр.; Amkraut A. A., Sоlоmon G. F. a. Kraemer H. C. Stress, early experience and adjuvant-induced arthrits in the rat, Psychosom. Med., v. 33, p. 203, 1971; Bonhomme F. a. o. Arthritogenicity of unaltered and acetylated cell walls of mycobacteria, Int. Arch. Allergy, v. 36, p. 317, 1969; Carter R. L., Jamison D. G. a. Vоllum R. L. Histological changes evoked in mice by Freund’s complete adjuvant, J. Path. Bact., v. 97, p. 503, 1969; Laufer A., Tal C. a. Behar A. J. Effect of adjuvant (Freund’s type) and its components on the organs of various animal species, Brit. J. exp. Path., v. 40, p. 1, 1959; Pearson С. M. Development of arthritis, periarthritis and periostitis in rats given adjuvants, Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), v. 91, p. 95, 1956; Pearson C. M. a. Wood F. D. Studies of arthritis and other lesions induced in rats by the injection of mycobacterial adjuvant, Amer. J. Path., v. 42, p. 73, 1963; Pearson C. M., Waksman В. H. a. Sharp J. T. Studies of arthritis and other lesions induced in rats by injection of mycobacterial adjuvant, J. exp. Med., v. 113, p. 485, 1961, bibliogr.; Rosenthale M. E. A comparative study of the Lewis and Sprague Dawley rat in adjuvant arthritis. Arch. int. Pharmacodyn., v. 188, p. 14, 1970, bibliogr.; Steiner J. W., Langer B. a. Sсhatz D. L. The local and systemic effects of Freund’s adjuvant and its fractions. Arch. Path., v. 70, p. 424, 1960, bibliogr.; Waksman B. H. a. Bullington S. J. Studies of arthritis and other lesions induced in rats by injection of mycobacterial adjuvant, Arch. Ophthal., v. 64, p. 751, 1960, bibliogr.; Waksman B. H. a. Wennersten C. Passive transfer of adjuvant arthritis in rats with living lymphoid cells of sensitized donors, Int. Arch. Allergy, v. 23, p. 129, 1963.
И. Н. Кокорин; В. И. Пыцкий (Адъювантная болезнь).
Адъювант
Адъюва́нт (adjuvant) — вещество или комплекс веществ, используемое для усиления иммунного ответа при введении одновременно с иммуногеном. В отличие от иммуномодуляторов, они применяются для усиления конкретного иммунного ответа (например, при вакцинации) чаще всего в здоровом организме, а не для нормализации нарушенных реакций иммунной системы при патологии.
Содержание
Механизм действия
Наиболее широко применяемые адъюванты
Адъювантами могут быть неорганические (фосфаты алюминия и кальция, хлористый кальций и др.) и органические (агар, глицерол, протамины и др.) вещества. В настоящее время наиболее широко применяются следующие адъюванты
Представляет собой водно-жировую эмульсию, содержащую вазелиновое масло, ланолин и эмульгатор. Депонирует антиген и усиливает его захват фагоцитами.
Включает в себя, кроме вышеперечисленных компонентов, БЦЖ или мурамилдипептид. Это позволяет ему дополнительно активировать макрофаги и костимулировать Т-клетки.
Гидроксид алюминия, 
, который благодаря высокой способности к сорбции выполняет функцию антигенного депо а также неспецифически усиливает фагоцитоз.
Изготовлен из ослабленного штамма B. pertussis, сорбированного на . Действие гидроксида алюминия дополняется активацией макрофагов и костимуляцией Т-клеток.
Представляет собой липидные мицеллы, окружающие белковые (чаще всего вирусные) частицы. Частицы антигена доставляются непосредственно в цитозоль Т-клеток, чем достигается индукция Т-киллеров.
Адъюванты нового поколения
В отличие от квасцов, которые издавна используют для повышения эффективности вакцинирования, адъювант Фрейнда не может применяться с аналогичной целью из-за многочисленных побочных эффектов. Это побудило к поискам безвредных адъювантов. Среди них высокой эффективностью отличаются некоторые полиэлектролиты, такие как, полиоксидоний.
Применение адъювантов
Литература
Ссылки
Полезное
Смотреть что такое «Адъювант» в других словарях:
адъювант — (в фармацевтике) Компонент, усиливающий желаемый ответ организма|иммуностимулятор [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN adjuvant … Справочник технического переводчика
адъювант — (лат. adjuvans, adjuvantis помогающий, способствующий) 1) вещество, повышающее иммуногенность антигена; некоторые А. используются при изготовлении вакцинных препаратов (гидрат окиси алюминия и др.); 2) вещество, усиливающее или пролонгирующее… … Большой медицинский словарь
АДЪЮВАНТ — (от лат. adjuvans помогающий), неспецифические вещества различного происхождения, стимулирующие иммуногенез. Наиболее широко изучены А., применяемые для усиления действия антигенов при изготовлении вакцин. К ним относятся: гидроокись… … Ветеринарный энциклопедический словарь
АДЪЮВАНТ — Вещество, оказывающее неспецифическое стимулирующее действие на иммуногенез. Адъюванты имеют различное происхождение, характеризуются разнообразием состава и строения. Часто используют полный и неполный адъюванты Фреинда, в состав которых в… … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных
АДЪЮВАНТ — Дополнительный терапевтический метод. Применение психотропных медицинских препаратов обычно рассматривается как адъюван тные процедуры … Толковый словарь по психологии
АДЪЮВАНТ — (adjuvant) любое вещество, используемое в соединении с другим веществом для повышения активности последнего. Соли алюминия часто используют в качестве адъюванта в процессе приготовления противодифтерийной и противостолбнячной вакцин: в результате … Толковый словарь по медицине
адъювант Фрейнда — — [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN freund’s adjuvant … Справочник технического переводчика
адъювант неполный Фрейнда — см. Фрейнда неполный адъювант … Большой медицинский словарь
адъювант полный Фрейнда — см. Фрейнда адъювант … Большой медицинский словарь
Регламент
Глава 16. Адъюванты вакцин для лечения и профилактики заболеваний человека
1. Введение Адъюванты (иммуностимуляторы или иммуномодуляторы) десятилетиями использовались для усиления иммунного ответа на антигены вакцин. Адъюванты включаются в состав вакцины с целью более быстрого формирования выраженного и длительно сохраняющегося специфического иммунного ответа. Целью включения адъювантов в состав вакцины является усиление, ускорение и продление желательного специфического иммунного ответа на антигены вакцины. Преимущества использования адъювантов в вакцинах заключаются в повышении иммуногенности антигенов, изменении характера иммунного ответа, снижении количества антигена, необходимого для успешной иммунизации, сокращения частоты необходимых повторных иммунизаций и улучшения иммунного ответа у пожилых и ослабленных вакцинированных субъектов. Адъюванты можно выборочно 635 использовать для оптимизации требуемого иммунного ответа, например, по отношению к классам иммуноглобулинов и индукции реакций на основе цитотоксических лимфоцитов или Т-хелперов. Кроме того, некоторые адъюванты можно использовать для стимуляции гуморального ответа на поверхности слизистых. Интерес к адъювантам вакцин объясняется несколькими причинами. Производители вакцин и органы здравоохранения (например, ВОЗ) направляют усилия на улучшение существующих вакцин и разработку новых. В последние годы наметились перспективы появления новых потенциальных вакцин против инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний, а также для лечения рака и бесплодия. Во многих случаях из-за низкой иммуногенности вакцин требуются адъюванты. Новые технологии в области аналитической биохимии, возможности очистки на макромолекулярном уровне, использование рекомбинантных технологий и достижения в области глубокого понимания иммунологических механизмов и патогенеза заболеваний помогут улучшить техническую базу для разработки и применения адъювантов для новых вакцин. Адъюванты могут быть классифицированы по происхождению (натуральные, синтетические или эндогенные), по механизму действия, а также по физическим или химическим свойствам. Классы адъювантов, наиболее часто описываемые в настоящее время, указаны в подразделе 2.2 настоящей главы. Активность адъювантов является результатом нескольких факторов, и усиленный иммунный ответ, полученный с помощью 1 антигена, как правило, не может быть распространен на другой антиген. Поскольку различные антигены различаются по физическим, биологическим и иммуногенным свойствам, им необходимы 636 соответствующие адъюванты. Выбор адъювантов должен быть обусловлен типом желаемого иммунного ответа и соединен с антигеном таким способом, чтобы обеспечить развитие оптимального типа ответа с минимальными побочными эффектами. Основное свойство большинства адъювантов заключается в их способности депонировать антиген, то есть адсорбировать его на своей поверхности и длительное время сохранять в организме, защищать антиген от разрушения и элиминации, что увеличивает продолжительность влияния антигена на иммунную систему. Основные аспекты воздействия адъювантов представляют собой способность антигена, определяемую физическими свойствами антигена в вакцине, захват антигена(адъюванта), распределение (направленное воздействие на конкретные клетки), стимуляцию (модуляцию) иммунной системы, которая включает в себя регуляцию как количественных, так и качественных аспектов последующих иммунных реакций, защиту антигена от разложения и выведения. Наиболее сильные адъюванты содержат в своем составе микроорганизмы ослабленных штаммов или какие-либо субстанции, извлеченные из них. Эти компоненты являются стимуляторами компонентов системы врожденного иммунитета, включая макрофаги и другие антигенпрезентирующие клетки. Для направленной доставки антигена в лимфоидные органы используют липосомы (липидные пузырьки). Это позволяет точно дозировать антиген и избежать его влияния на структуры, не вовлеченные в формирование иммунного ответа. Основные механизмы проявления активности адъювантов: оптимизация презентации антигена, который определяет специфичность действия вакцины; 637 формирование депо антигена, увеличивающего срок его воздействия на систему иммунитета; распределение антигена в организме (направленная доставка антигена к клеткам иммунной системы); прямое стимулирующее (модулирующее) действие на клетки иммунной системы, которые в конечном итоге ответственны за количественные и качественные аспекты стимуляции иммунного ответа; защита антигена от деградации и элиминации. В целом механизм действия адсорбентов и мелкодисперсных адъювантов включает в себя презентацию антигена иммунной системе, в то время как микробные, синтетические и эндогенные адъюванты действуют путем прямой стимуляции или модуляции иммунной системы. Помимо их роли в презентации антигена иммунной системе, механизм действия эмульсий заключается в стимуляции медленного высвобождения антигена и его защиты от быстрого выведения. Использование адъювантов продленного действия, например, минеральных солей, сопровождается образованием воспалительного очага в области инъекции, что может привести к синтезу провоспалительных цитокинов и стимуляции врожденного иммунитета, важного для первых этапов иммунного ответа. Таким образом, оценка качества рецептуры вакцины с адъювантом охватывает такие аспекты, как демонстрация совместимости адъюванта с антигенным компонентом, присутствующим в вакцине, доказательство правильной и стабильной ассоциации антигена с адъювантом, демонстрация отсутствия значительной диссоциации на протяжении срока хранения, степень ассоциации на протяжении срока хранения, влияние адъюванта на анализ компонентов, биохимическую чистоту и пирогенность. В качестве примера ассоциации – адсорбция характерна 638 для гелей гидроксида алюминия, гелей фосфата алюминия, гелей фосфата кальция и ISCOMS, в то время как ионные взаимодействия характерны для заряженных мицелл диметилдиоктадециламмония (DDA). Механизмом ассоциации для эмульсий и липосом является инкапсуляция. Для производных сапонинов или других экстрактов взаимодействие с антигенами является липофильным (гидрофильным) или ионным. В прошлом разрабатывалось много адъювантов, однако они никогда не использовались для плановой вакцинации из соображений безопасности, например, острой токсичности и возможности отсроченных побочных эффектов. Таким образом, следует сопоставлять преимущества адъювантной вакцины и риск вызываемой ей нежелательной реакции. Нынешняя точка зрения на соотношение риск- польза для вакцинации отдает предпочтение безопасности перед эффективностью, если вакцина предназначена для здорового населения. Однако в группах высокого риска, включая пациентов с онкологическими заболеваниями и СПИД, и для других терапевтических вакцин при существенной пользе от вакцины может быть приемлемым повышенный уровень токсичности. Таким образом, в соответствующих случаях следует предусмотреть доклиническую оценку безопасности. Даже при отсутствии серьезных нежелательных эффектов в ходе обширных доклинических исследований токсикологических аспектов и безопасности нельзя гарантировать, что новая рецептура вакцины с адъювантом не представляет риска для вакцинированных и не приведет к неожиданным явлениям. Непредсказуемость влияния адъюванта на организм человека является результатом сложного взаимодействия между такими факторами, как путь введения, доза антигена и природа 639 антигена. По этой причине окончательная оценка безопасности новой разработанной рецептуры вакцины может проводиться только на основании клинических исследований. 2. Область применения В методических рекомендациях отражены вопросы оценки качества, доклинических и клинических исследований новых или уже используемых адъювантов в составе вакцин. Требования к используемым в настоящее время адъювантам (например, гидроксиду алюминия, алюминию алюминия или кальция фосфату), изложенные в данном документе, зависят от особенностей индивидуальных вакцин и должны рассматриваться отдельно в каждом конкретном случае. 2.1. Вакцины Вакцины, рассмотренные в данном документе, обеспечивают формирование иммунитета против инфекционных заболеваний. Вакцины могут содержать 1 или более из следующих компонентов: организмы, инактивированные химическим или физическим способом, сохраняющие адекватные иммуногенные свойства; живые организмы, которые естественно авирулентны или которые были подвергнуты воздействию для аттенуации их вирулентности, сохраняющие адекватные иммуногенные свойства; антигены, выделенные из инфекционного агента или секретируемые им; антигены, полученные методом рекомбинантной ДНК- технологии; 640 живые рекомбинантные векторы, продуцирующие антигены in vivo при вакцинации хозяина (носителя); плазмидные ДНК; антигены, полученные путем химического синтеза in vitro. Антигены могут находиться в нативном состоянии, могут быть укорочены или модифицированы вследствие мутаций, могут быть обезврежены за счет химических или физических средств и (или) агрегированы, полимеризованы или конъюгированы с носителем (см. также соответствующую статью Фармакопеи Союза). В настоящее время адъюванты не используются в живых вакцинах для медицинского применения, однако этого нельзя исключить в будущем. Основные положения данных рекомендаций применимы к оценке качества и доклиническим исследованиям по изучению терапевтических вакцин (например, таких антиидиотипических вакцин, как моноклональные антитела, используемые в качестве иммуногенов, противоопухолевых вакцин, аллергенов для специфической иммунотерапии (аллергоидов) и вакцин, используемых для лечения инфицированных лиц), однако клинические аспекты терапевтических вакцин не входят в рамки данного документа. 2.2. Адъюванты Адъювант вакцины представляет собой компонент, стимулирующий иммунный ответ на антиген и (или) модулирующий желательные иммунные реакции. Адъюванты включают в себя (но не ограничиваются): минеральные соли, например, гидроксид алюминия и гель фосфата алюминия или кальция; масляные эмульсии и составы на основе сурфактантов, например, 641 MF59 (микропсевдоожиженный детергент, стабилизированный эмульсией «масло в воде»), QS21 (очищенный сапонин), AS02 [SBAS2] (эмульсия «масло в воде» + MPL + QS21), Montanide ISA-51 и ISA-720 (стабилизированная эмульсия «масло в воде»); адъюванты в виде твердых частиц, например, виросомы (униламеллярные липосомальные частицы с инкорпорированным гемагглютинином гриппа), AS04 ([SBAS4] соль алюминия с MPL), ISCOMS (структурированный комплекс сапонинов и липидов), полилактид-ко-гликолид (PLG); микробные дериваты (натуральные или синтетические), например, монофосфорил липида А (MPL), Detox (MPL + структуры клеточной стенки M. Phlei), AGP [RC-529] (синтетический ацилированный моносахарид), DC_Chol (липоидный иммуностимулятор, способный самоорганизовываться в липосомы), OM-174 (производное липида А), CpG-мотивы (синтетические олигонуклеотиды, содержащие иммуностимулирующие CpG-последовательности), модифицированные LT и CT (генетически модифицированные бактериальные токсины для обеспечения нетоксигенного адъювантного эффекта); эндогенные иммуномодуляторы человека, например, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (hGM-CSF) или интерлейкин-12 (hIL-12) (цитокины, которые применяются как в форме протеина, так и в виде кодирующих их плазмид), Immudaptin (C3d-тандемная область); такие инертные частицы, как частицы золота. В случае разработки новых видов адъювантов на них также будут распространяться требования настоящей Главы. Активный ингредиент комбинированной вакцины, оказывающий адъювантное действие на другие активные ингредиенты вакцины, не 642 входит в сферу применения данной настоящей главы. Кроме того, в сферу применения данной настоящей главы не входят носители гаптенов, антигены (например, CRM197, менингококковый OMP, столбнячный и дифтерийный анатоксины, которые используются для конъюгирования полисахаридов) и вспомогательные вещества, например, HSA. В готовой вакцине могут присутствовать несколько адъювантов. Они могут быть объединены с одним из антигенов или всеми антигенами, представленными в вакцине, либо каждый адъювант может быть объединен с одним конкретным антигеном. В любом случае указания, содержащиеся в настоящей главе, при необходимости применимы к каждому адъюванту и каждой комбинации антиген-адъювант. 3. Качество Происхождение и природа адъювантов, используемых или разрабатываемых в настоящее время, весьма разнообразны. Например, адъюванты на основе алюминия состоят из простых неорганических соединений, PLG представляет собой полимерный углевод, вирус- липосомные вакцины можно получить из неоднородных вирусных частиц, MDP получают из бактериальной клеточной стенки, сапонины имеют растительное происхождение, сквален получают из печени акулы, а рекомбинантные эндогенные иммуномодуляторы получают из рекомбинантных бактерий, дрожжей или клеток млекопитающих. Следовательно, в данной методической рекомендации нецелесообразно приводить полный список отдельных анализов, которые следует выполнять для любого конкретного адъюванта или комбинации 643 адъювант – антиген. Указания, приведенные ниже, должны использоваться производителями адъювантов (вакцин) в индивидуальном порядке исходя из того, насколько они подходят для их адъюванта. Следует придерживаться соответствующих статей Фармакопеи Союза. Для производителей рекомбинантных белков- адъювантов следует использовать соответствующие требования настоящих Правил, например, по клеточным субстратам (глава 1), вирусологической безопасности (главы 2 – 3), рекомбинантным ДНК и белкам (глава 5). 3.1. Адъюванты. 3.1.1. Описание. Следует подробно описать природу или химический состав адъюванта в регистрационном досье. При использовании более чем 1 адъюванта или в случае если адъювант состоит из более чем 1 компонента следует описать функции каждого адъюванта или компонента в той степени, в какой они известны. 3.1.2. Производство. Производство адъюванта должно быть описано максимально подробно. Особое внимание должно быть уделено источнику получения адъюванта, особенно если он имеет биологическое происхождение или есть какие-либо особенности его применения. Следует определить параметры, важные для правильных физических, биохимических, биологических или адсорбционных свойств адъюванта. Особое внимание должно быть обращено на использование любых биологических продуктов, получаемых от крупного рогатого скота (бычья сыворотка и др.), при использовании таких материалов требуется соблюдение требований соответствующих 644 рекомендаций Союза и статей Фармакопеи Союза по минимизации риска передачи возбудителей губчатой энцефалопатии животных через лекарственные средства медицинского и ветеринарного назначения. 3.1.3. Характеристика Следует описать результаты оценки ряда параметров, используемых для изучения характеристик адъювантов. Необходимо выявить и описать основные параметры. Такие параметры могут являться частью регулярных анализов партий адъюванта. Кроме того, для изучения характеристик адъюванта следует анализировать другие параметры, и некоторые из них могут также входить в состав регулярных анализов. Параметры, которые определяют адъювант, зависят от природы адъюванта и могут включать в себя в числе прочего: химический состав (качественный и количественный); физические характеристики (например, визуальную оценку, плотность, вязкость, рН, размерность и распределение частиц по размерам, поверхностный заряд); биохимические характеристики; чистоту (например, содержание эндотоксинов, микробиологическую чистоту, остаточное содержание производственных примесей). 3.1.4. Рутинные исследования. Перечень показателей качества должен быть обоснован результатами их оценки при характеристике адъюванта, как это указано выше. Должна быть установлена спецификация и определены требования к оцениваемым показателям. 645 3.1.5. Стабильность. Оценка соответствующих физико-химических и (или) биологических свойств, основанных на характеристике адъюванта, должна проводиться при изучении стабильности адъюванта во время хранения. Важными параметрами могут быть степень диссоциации антигена и адъюванта и целостность антигена. 3.2. Комплекс адъювант – антиген. 3.2.1. Изучение и производство комплексного препарата. Объединение антигена с адъювантом является главным ключевым моментом в получении конечного комплекса адъювант – антиген. Механизм и эффективность ассоциации (связывания) между антигеном и адъювантом должны быть определены и описаны. Аспекты, которые важны для биологических свойств комплекса адъювант – антиген (например, адсорбция, характеристики связывания), должны быть идентифицированы и проверены. Если используется более 1 адъюванта при объединении их в комплекс, то должна быть представлена информация о каждом адъюванте и проведены исследования по оценке совместимости вводимых в комплекс адъюванта и антигена. Если конечная вакцина содержит более 1 комплекса адъювант – антиген, требуется выполнение анализов, соответствующих природе адъювантов (идентичных или нет), в том числе анализа нежелательных эффектов между различными комплексами адъювант – антиген. Процесс производства комплекса адъювант–антиген должен быть детально описан. Промежуточный продукт может быть получен в процессе формирования комплекса адъюванта и антигена до сведения 646 компонентов. В другом случае сведение компонентов происходит одновременно на этапе объединения адъюванта и антигена (конечный балк). Альтернативный процесс включает одновременное объединение адъюванта и антигена и розлив готового продукта. Наполнитель или растворитель, добавленные к комплексу адъювант-антиген во время приготовления конечного балка (формулирования), не должны оказывать негативного влияния на активность вакцины или ассоциацию (связывание) антигена с адъювантом. В каждом конкретном случае характеристика, рутинный контроль и изучение стабильности промежуточного продукта, конечного балка и готового продукта (когда приемлемо) должны быть выполнены в соответствии с пунктом 3.2.2. настоящих Правил. Изготовитель вакцин должен ясно определить и обосновать испытания, которые выполняются на каждой стадии. 3.2.2. Характеристика. Комплекс адъювант – антиген должен быть соответствующим образом охарактеризован. Характеристика комплекса может включать в себя соотношение и последовательность объединения антигена с адъювантом, целостность антигена в ассоциации с адъювантом, влияние адъюванта на возможность определения антигена и степень возможности диссоциации комплекса антигена с адъювантом (стабильность). Другие параметры могут включать в себя химические и физические характеристики (например, размер частиц, вязкость). 3.2.3. Обычные (рутинные) исследования. Тесты для рутинной оценки комплекса адъювант – антиген должны быть определены (идентифицированы), описаны и валидированы. Такие тесты должны быть основаны на параметрах, 647 полученных во время полной характеристики комплекса адъювант– антиген. 3.2.4. Стабильность. Долгосрочная стабильность комплекса адъювант – антиген должна быть исследована с оценкой соответствующих физических и биохимических свойств. Важными параметрами являются степень диссоциации комплекса антиген – адъювант и его целостность. 3.2.5. Несколько антигенов в комбинации с адъювантом. Если в готовый препарат вакцины включают антиген в дополнение к антигену, существующему в комбинированной вакцине с адъювантом, необходимо изучить эффект, оказываемый адъювантом на этот дополнительный антиген, используя соответствующие для этого антигена исследования. Точно так же любые эффекты дополнительного антигена следует оценить в отношении его воздействия на комплекс адъювант – антиген. Если в состав конечного продукта вакцины включают более 1 комплекса антиген – адъювант, исследования проводят в соответствии с происхождением адъюванта (является ли он идентичным тому, который присутствует в вакцине) для того, чтобы исключить побочные эффекты, обусловленные взаимодействием между различными комплексами адъювант – антиген. 3.3. Конечный продукт. Готовый препарат вакцины должен исследоваться по таким показателям, как активность, подлинность и стабильность. Данные исследования должны проводиться в соответствии с требованиями Фармакопеи Союза, а также настоящей главы. Методики для 648 тестирования препарата и изучения стабильности должны быть определены и валидированы. Взаимодействие адъюванта с антигеном может влиять на результаты некоторых стандартных тестов в случае их использования для исследования на стадии готового продукта или сформулированного конечного балка. Альтернативные методы исследования должны быть разработаны отдельно, они будут отличаться от методов исследования, проводимых на более ранних стадиях, когда воздействие адъювантов на антиген отсутствует. 4. Биомедицинские исследования, проводимые без участия человека в качестве субъекта. Доклинические исследования 4.1. Свойства адъюванта. Механизм проявления действия адъювантов: физическое воздействие на механизмы представления вакцинного антигена; оптимизация проявлений антигенной активности; доставка антигена в клетки, отвечающие за инициацию иммунного ответа и координирующие взаимодействие важных компонентов иммунной системы, – антигенпрезентирующие клетки; воздействие на специфические антигенпрезентирующие клетки (дендритные клетки, клетки Лангерганса, макрофаги и др.), которое проявляется стимулированием Toll-подобных рецепторов за счет аналогов липида A или за счет усиливающего иммунный ответ соединения олигодеоксинуклеотида (ODNs) CpG; усиление или модулирование иммунного ответа, обусловленное, например, внутриклеточным транспортированием и процессированием 649 антигена, ассоциацией с молекулами MHC класса I или II, экспансией Т- лимфоцитов, с продукцией различных цитокинов. Должно быть дано объяснение механизма действия адъювантов. Повышение интенсивности иммунного ответа на комплекс адъювант– антигена должно быть показано в исследованиях на соответствующей модели животных. Следует установить, воздействует ли адъювант на клетки системы врожденного иммунитета. Кроме того, необходимо выяснить степень активации гуморального и клеточного звена иммунного ответа при использовании адъюванта вместе с антигеном. Данные, полученные при использовании комплекса адъюванта с другими антигенами, могут служить основой для выяснения механизма действия адъюванта. Идеально подходящая модель животных должна продемонстрировать защиту иммунизированных животных при введении смертельной дозы патогенных микроорганизмов (при инфекционной патологии). Если такая модель отсутствует, следует использовать в экспериментах тот вид животных, у которых индуцированный иммунный ответ будет подобен ожидаемому иммунному ответу у человека. В качестве уточняющей информации могут быть использованы сведения из научной литературы. 4.2. Фармакокинетика. Фармакокинетические исследования (т. е. исследования с определением концентрации антигена в сыворотке крови) не требуются. В некоторых случаях, фармакокинетические исследования могут иметь значение для понимания механизма действия адъюванта. 650 4.3. Изучение токсичности адъювантов. Методология, используемая для изучения токсичности адъювантов, должна соответствовать методологии изучения вакцины. Вакцины с адъювантами могут назначаться при использовании в медицинской практике с интервалом от нескольких недель до нескольких лет. Обычно адъюванты вводятся в небольшом количестве несколько раз за весь период жизни. Адъювант исследуется в соответствии с его использованием в составе вакцины, и стратегия тестирования должна отражать это использование. Адъюванты могут использоваться с различными антигенами, часто они не обладают видовой специфичностью. Адъюванты могут быть связаны с различными антигенами и должны быть изучены на 2 видах животных, если нет других указаний (на грызунах и не грызунах). Адъюванты, принадлежащие к различным биологическим классам, могут проявлять высокий уровень видовой специфичности (например, некоторые цитокины), поэтому исследовать их более чем на 1 виде животных не имеет смысла. Однако другие адъюванты (например, масляные эмульсии) проявляют меньшую специфичность и принципы токсикологических исследований базируются на общих требованиях для изучения токсичности, т. е. исследования проводят как минимум на 2 видах животных. Результаты, полученные при исследовании на 1 виде животных, будут подтверждены результатами исследования на другом виде животных. 651 Выбор вида животных зависит прежде всего от выбора антигена, для которого предназначен адъювант. Идеальным является вид животных, на котором уже проводили исследования. 4.3.1. Местная переносимость. Местнораздражающее действие адъюванта должно быть изучено в зависимости от пути его введения. Например: для орального и внутриносового пути введения должна быть изучена местная и общая толерантность; для инъекционных вакцин особое внимание должно быть уделено возможности индукции поздней гранулематозной реакции, например, при использовании частиц или минерального масла. 4.3.2. Индукция гиперчувствительности и анафилактической реакции. Адъюванты могут проявлять иммуногенные свойства, поэтому следует оценивать возможность развития гиперчувствительности на соответствующих моделях (например, в тестах пассивной кожной анафилаксии [PCA] и активной системной анафилаксии [ASA]). Адъюванты могут индуцировать повышение уровня специфического иммуноглобулина класса Е (IgE) к антигену вакцины, поэтому следует оценить возможность индукции реакций гиперчувствительности и анафилаксии на антиген при использовании адъюванта. 4.3.3. Пирогенность. Адъюванты должны быть проверены относительно их возможного пирогенного эффекта. Альтернативные тесты in vitro для оценки пирогенности субстанций могут быть использованы при условии их валидации. 652 4.3.4. Системная Мера вредного воздействия исследуемого материала на организм в условиях однократного или многократного введения. токсичность Адъюванты различных классов могут быть систематизированы по их способности вызывать токсические эффекты в различных органах. Система введения препарата должна быть разработана в соответствии с назначаемыми дозами, включая интервал при повторном введении, который предполагается при клиническом использовании. При проведении токсикологических исследований должны проводиться патоморфологические и гистологические исследования следующих органов и тканей: сердце, легкие, мозг, печень, почки, репродуктивные органы и др.; кожа (при подкожном пути введения); органы иммунной системы: селезенка, тимус, костный мозг, лимфатические узлы (локальные и отдаленные от места введения). Полное обследование органов и тканей рекомендуется в случае использования новых адъювантов, которые не изучались на этапе доклинических испытаний и не имеют опыта клинического применения. Токсичность главным образом вызвана иммуностимулирующим эффектом адъюванта, но также нельзя исключать его прямое токсическое воздействие на другие органы, не являющиеся органом- мишенью. Диапазон доз может оставаться относительно низким, соответствуя дозам при его клиническом использовании, не достигая максимально переносимой дозы. 4.3.5. Репродуктивная токсичность. В соответствии с программами вакцинации вакцина с адъювантом может быть предназначена также для женщин детородного возраста, поэтому важно изучить ее репродуктивную токсичность. Более того, вакцина может назначаться беременным женщинам для предупреждения инфекционного заболевания плода путем обеспечения пассивной 653 иммунизации. Исследование репродуктивной токсичности должно быть выполнено с адъювантом, предназначенным для использования в данном типе вакцин. Программа исследования должна быть составлена с учетом предполагаемой схемы применения вакцины. Иммунный ответ на бустерную дозу может отличаться от первичного ответа, в связи с этим первую дозу вакцины вводят до наступления беременности, а последующие бустерные дозы – во время беременности. 4.3.6. Генотоксичность. Адъюванты могут быть биологического или синтетического происхождения. В соответствии с требованиями глав 5.3 –5.4 настоящих Правил для биотехнологических продуктов общие требования к исследованию генотоксичности адъювантов биологического происхождения не всегда соответствуют требованиям к тем исследованиям, которые должны быть проведены для адъювантов иного происхождения. Для синтетических адъювантов исследования должны быть проведены по стандартной схеме, любые отклонения должны быть научно обоснованы. 4.3.7. Канцерогенность. Поскольку адъюванты предназначены для введения лишь несколько раз в жизни в низких дозах, риск прямой индукции опухолей этими соединениями незначителен. Кроме того, действие адъювантов направлено на стимуляцию иммунной системы, они не являются иммунодепрессантами общего действия, что снижает риск спонтанного образования лимфоидных опухолей. Таким образом, исследования канцерогенности не требуются. 4.3.8. Комбинация адъювантов. Использование субстанций с иммуномодулирующими свойствами совместно с адъювантами, оптимизирующими процесс презентации 654 антигена, может сопровождаться повышением активности адъюванта. Соответствующие исследования токсичности должны быть выполнены для обеспечения безопасности использования комбинации адъювантов в дополнение к исследованиям по каждому индивидуальному компоненту. Исследования токсичности с отдельными компонентами должны быть выполнены и включены в предварительные исследования. Исследование конечной комбинации должно быть выполнено в соответствии с требованиями GLP. 4.4. Токсичность адъюванта в сочетании с антигеном. Доклинические аспекты изучения безопасности комбинации адъюванта с предполагаемым антигеном должны проводиться в соответствии с требованиями соответствующих рекомендаций Союза. Особое внимание следует уделять аспектам, изложенным в настоящем разделе главы. 4.4.1. Местная переносимость. Инъекции антигенов в сочетании с адъювантами могут вызывать более выраженные местные реакции, чем реакции после применения только 1 адъюванта. Следует изучить оптимальное соотношение дозы адъюванта и антигена с точки зрения соотношения пользы и риска 4.4.2. Изучение токсичности многократного введения (хронической токсичности). Схема дозирования при исследовании хронической токсичности должна быть составлена в соответствии со схемой клинического применения. Чтобы установить безопасность схемы многократного введения (при котором увеличивается интенсивность иммунного ответа), количество введений при исследовании токсичности должно быть больше, чем планируется при вакцинации человека. 655 4.4.3. Характеристика иммунного ответа. Минимальные требования к проведению исследований иммуногенности на доклиническом этапе включают в себя необходимость изучения следующих аспектов: оценка соотношения «доза – эффект» путем исследования эффекта комбинации различных доз адъюванта с различными дозами антигена вакцины; сравнительные исследования для установления эффекта нового адъюванта в сравнении только с антигеном вакцины или адъюванта с уже известным адъювантом. Тип и интенсивность иммунного ответа (гуморальный или клеточный) определяют эффективность вакцины. Тип иммунного ответа, формирующийся на один и тот же антиген вакцины, может отличаться в экспериментах на животных и у человека. Поэтому вопрос об экстраполяции данных, полученных в исследованиях на животных, требует специального рассмотрения и должен решаться с большой осторожностью. С другой стороны, до начала клинических исследований следует представить обоснованную концепцию, полученную в ходе доклинических исследований. Если возможно, дальнейшие исследования должны быть направлены на более детальное изучение механизмов иммунологического действия нового адъюванта на соответствующих моделях животных (см. подраздел 4.1. настоящей главы). Рациональный выбор комбинации адъювантов должен базироваться на экспериментальных данных. 656 5. Клинические исследования. 5.1. Введение. Включение адъюванта в состав вакцины должно быть обосновано. В обосновании необходимо представить доказательства повышения иммунного ответа без увеличения местных и системных побочных реакций. При проведении клинических исследований необходимо показать, что количество адъюванта, включаемого в вакцину, вызывает усиление иммунного ответа на антиген вакцины, что повышает эффективность вакцинации, а также повышает уровень безопасности применения препарата. Включение адъюванта в состав комбинированной вакцины должно усилить иммунный ответ хотя бы на 1 антиген без развития отрицательного влияния на иммунный ответ на другие антигены вакцины. Особое внимание следует обратить на возможность развития и повышение частоты и (или) тяжести побочных реакций в результате включения адъюванта в вакцину. Поэтому связанный с адъювантом риск не должен превышать потенциальную пользу применения препарата в результате повышения иммунного ответа. В настоящем разделе рассматриваются следующие вопросы: проведение клинических исследований при включении новых адъювантов в новые препараты, которые не зарегистрированы, и (или) зарегистрированные профилактические вакцины; клинические исследования проводятся при внесении любых изменений (удаление, добавление и (или) замена) содержания адъюванта в зарегистрированных вакцинах. Общие принципы, указанные в настоящем разделе, применяются как для вакцин, содержащих 1 антиген, так и для комбинированных 657 вакцин вне зависимости от пути введения. Оценка некоторых особенностей характеристики иммунного ответа проводится в процессе изучения безопасности и эффективности препарата. Следует обратить внимание, что понятие «известный адъювант» применяется к вакцинам любого состава – к зарегистрированным вакцинам, содержащим 1 или несколько антигенов. Особенности различных программ исследований связаны со следующими положениями: новые вакцины – включение 1 или нескольких новых или известного адъюванта в новую вакцину для повышения иммунного ответа на 1 или несколько антигенов, проявляющегося в усилении эффективности вакцинации; внесение изменений в ранее зарегистрированные вакцины – изменения в зарегистрированные вакцины вносятся для усиления или регулирования иммунного ответа и (или) для повышения безопасности их применения. В некоторых случаях включение адъюванта в вакцину проводится с целью снижения необходимого количества антигена без изменений антигенных свойств вакцины (например, вакцина против пандемического гриппа). Изменения вносятся: при включении в препарат одного или нескольких новых или известных адъювантов; при повышении количества адъюванта; при снижении количества или удаления из препарата одного или нескольких адъювантов (без их замены); при замене одного или нескольких адъювантов на новые или известные адъюванты. 658 5.2. Предварительные исследования. Если в качестве адъюванта используется новое вещество или разработан новый состав, то в предварительных исследованиях необходимо установить эффективность адъюванта и влияние на тип иммунного ответа на антиген, который предполагается включить в этот комплекс. Если планируется использовать в вакцине более 1 адъюванта, то необходимо проведение исследований для оценки влияния комбинации адъювантов на иммунный ответ на антиген. Кроме того, при создании комбинированных вакцин, в которых содержится более 1 из элементов комплекса адъювант – антиген, необходимо изучение активности каждого адъюванта по отношению к введенным антигенам. 5.2.1. Влияние адъювантов на иммунный ответ. Исследование по оценке влияния адъюванта на иммунный ответ должно включать в себя изучение иммунного ответа при введении антигена без адъюванта, который должен содержаться в готовой вакцине, и антигена с адъювантом (адъювантами). При разработке комбинированных вакцин достаточно исследований, в которых следует провести сравнение иммунного ответа на комбинацию антигенов без адъюванта и комбинацию антигенов вместе с каждым из адъювантов. В процессе проведения таких ограниченных предварительных исследований особое внимание следует уделять изучению безопасности. Обычно подобные исследования проводятся на небольшой популяции здоровых лиц. В случае если вакцина предназначена для введения новорожденным, маленьким детям или лицам старческого возраста, она должна быть изучена в соответствующей возрастной популяции при отсутствии принципиальных противопоказаний для 659 проведения таких исследований после проведения исследований в популяции взрослых пациентов. Исследование должно включать в себя комплексную оценку всех возможных потенциальных последствий влияния адъюванта на иммунный ответ на все антигены, которые включены в состав разрабатываемой вакцины. Кроме того, необходимо изучение иммуногенных свойств самого адъюванта. Набор тестов при изучении иммуногенности зависит от происхождения и особенностей строения изучаемых антигенов и адъювантов. Дополнительно следует учитывать результаты изучения иммуногенности на экспериментальных моделях при изучении механизма действия адъювантов. При оценке гуморального звена иммунитета необходимо не только определение уровня антител, но и характеристика антител (нейтрализующие, опсонирующие или бактерицидные антитела), исследования проводятся с использованием международного стандарта (стандарт ВОЗ или его эквивалент). При характеристике антител, которые вырабатываются в ответ на введение вакцины, необходимо определить, к какому классу и подклассу принадлежат антитела, определить свойства иммуноглобулинов класса А (IgA) (циркулирующие в крови или секреторные) и охарактеризовать другие свойства антител, например, авидность. Оценка клеточного звена иммунитета проводится по определению антигенспецифического Т-клеточного ответа, который включает в себя характеристику Th1, Th2, Т-регуляторных клеток и определение уровня соответствующих цитокинов. Спектр исследуемых показателей должен быть обоснован и может быть не ограничен указанными исследованиями. Диапазон проводимых анализов с обоснованием каждого исследования следует привести в регистрационном досье. 660 При использовании нового адъюванта необходимо изучить безопасность применения адъюванта с антигеном на доклиническом этапе. Аналогичные материалы по доклиническому изучению должны быть представлены, если изменяется доза (на более высокую дозу) или применяется новый путь введения адъюванта, который ранее не применялся. В случае если имеется потенциальная угроза кумуляции адъюванта в организме, необходима оценка фармакокинетических показателей в клинических исследованиях. Необходимость в проведении клинических испытаний только адъювантов должна быть обсуждена с представителями уполномоченных органов государств- членов. 5.2.2. Исследование подбора дозы. Необходимо представить убедительные доказательства (достаточное количество данных), что соотношение количества адъюванта и антигена, выбранное для дальнейшего исследования, является оптимальным для развития иммунного ответа на антиген с минимальным риском развития нежелательных явлений. Основной целью при составлении большинства комбинаций адъювант – антиген является использование как можно меньшего количества 1 или обоих компонентов, чтобы достигнуть необходимого удовлетворительного иммунного ответа с минимальным уровнем нежелательных явлений. Предварительное количественное содержание адъюванта и антигена в комбинированном препарате определяется на основании исследований, представленных в разделе 5.2.1. настоящих Правил, которые могут проводиться одновременно с исследованием по подбору доз. Объем исследований по подбору доз зависит от свойств предполагаемого готового препарата. Например, если предполагается использование адъюванта в дозах, которые применяются как минимум в 661 1 зарегистрированном препарате, то основное внимание при исследовании должно быть направлено на характеристику применения разных доз антигена. Однако, если планируется включение адъюванта в состав препарата, доза антигена или комбинации антигенов в котором используется в 1 или нескольких зарегистрированных препаратах, то основное внимание должно быть уделено характеристике количества адъюванта. В случае использования в препарате нового адъюванта и (или) нового антигена (отдельно или в комбинации) необходимо проведение более широких исследований по подбору доз. Оптимальным является проведение исследования в популяции лиц, которым показана вакцинация данными антигенами (целевая популяция). Однако в том случае, если трудно подобрать необходимую популяцию, исследование подбора дозы может быть проведено в популяции, для которой отсутствуют показания к назначению вакцины. В случае если исследование подбора дозы не позволяет установить 1 дозу комплекса антиген – адъювант и не для 1 препарата, то возможно будет необходимым проведение подтверждающих исследований для ряда параметров. При этом желательны исследования по характеристике иммунного ответа на подобранную комбинацию антиген – адъювант по крайней мере на субъектах, включенных в подтверждающие испытания. 5.3. Подтверждающие испытания. 5.3.1. Общие выводы. Клинические исследования в основном являются рандомизированными, двойными слепыми и контролируемыми. Дизайн исследований зависит от свойств комплекса антиген – адъювант. При модификациях, которые касаются изменения содержания антигена в 662 зарегистрированных вакцинах, должна проводиться оценка иммунного ответа для подтверждения его протективной направленности. Необходимо представление данных изучения иммуногенности, если при проведении исследований не было получено подтверждение протективной направленности иммунного ответа. Эти исследования должны быть проведены в популяции пациентов, для лечения или профилактики которых препараты разработаны. Если данные исследования должны включать в себя широкий возрастной диапазон пациентов, необходимо отдельно проводить исследования в группах, различающихся по возрастному составу. Например, если установлено усиление иммунного ответа на введение антигена в отдельной возрастной группе, необходимо проводить изучение иммуногенности в различных по возрастному составу группах пациентов. 5.3.2. Возможные варианты программы исследования. 5.3.2.1. Новые вакцины с новым или известным адъювантом. Для новых вакцин (вакцин, содержащих антигены, не описанные в Фармакопее Союза или нормативных документах ВОЗ, вакцин, в которых использован новый конъюгат для известного антигена, или любых новых комбинаций известных и (или) новых вакцин) применяются требования, которые не рассматриваются подробно в настоящих Правилах. 5.3.2.2. Изменение содержания адъюванта в зарегистрированной вакцине Необходимо проведение как минимум 1 подтверждающего исследования для обоснования изменений содержания адъюванта. Дизайн исследования зависит от того, с какой целью осуществляется изменение. 663 Дизайн исследований при внесении изменений для повышения эффективности препарата. Если основной целью является повышение иммунного ответа на 1 или несколько антигенов или прямое влияние иммунного ответа на предполагаемый конечный эффект, программа исследования должна быть разработана для доказательства превосходства измененного препарата над существующим зарегистрированным препаратом. В процессе проведения исследований комбинированных препаратов должно быть доказано превосходство иммунного ответа модифицированного препарата по крайней мере к 1 из антигенов. Вторичной целью данных исследований должна быть демонстрация того, что иммунный ответ на другие антигены, которые входят в состав модифицированного препарата, не хуже. Демонстрация доказательства не меньшей активности по отношению к другим антигенам может быть использована только в том случае, если предварительно доказано превосходство адъюванта по показателям эффективности. Если предполагается использование адъюванта в большей дозе, чем в ранее зарегистрированном препарате, или изменение способа введения, необходимы дополнительные исследования по оценке безопасности. Необходимость проведения таких исследований должна быть обсуждена со специалистами национального регуляторного органа до подачи заявления для регистрации модифицированного препарата. Дизайн исследований при внесении изменений для повышения безопасности препарата. Если основной целью разработки вакцины является повышение безопасности, в программу клинических испытаний необходимо включить исследования, которые должны доказать, что иммунный ответ на антиген модифицированной вакцины имеет не меньшую 664 эффективность, чем ответ на каждый антиген зарегистрированной вакцины. Критерии для оценки не меньшей эффективности должны быть обоснованы при характеристике свойств антигена. Следует ожидать, что результаты данного исследования позволят обосновать улучшение показателей безопасности. Данные по безопасности должны свидетельствовать о достоверном повышении ответной реакции, учитывая особенности адъюванта и антигена. В некоторых случаях может быть целесообразным обратить внимание на возможность развития иммунно-опосредованных реакций. В любом случае отношение «риск – польза» при применении модифицированных препаратов должно быть таким же благоприятным, как и для зарегистрированного препарата. Пострегистрационные наблюдения должны проводиться во всех случаях внесения изменений в состав зарегистрированной вакцины, содержащей адъювант. 5.3.3. Статистическая обработка результатов исследования. Оцениваемые показатели и методы, используемые для проведения статистического анализа, должны быть представлены в протоколе клинических исследований. Объем выборки должен быть достаточным для достоверного обоснования результатов исследований. Необходимо заранее представить и обосновать применение критериев не меньшей активности и обосновать значение допустимого предела при их применении. При планировании клинических испытаний необходимо учесть возможные проблемы, связанные с объемом выборки. При составлении программы исследований могут быть использованы научные рекомендации и требования актов, входящих в право Союза.
ЛАБМГМУ — коммерческая организация, специализирующаяся на проведении и организации клинических и доклинических испытаний лекарственных препаратов и биологически активных добавок.
Взвешенный и ответственный подход, высокая квалификация сотрудников компании, глубокие теоретические знания и богатый опыт работы позволяют проводить исследования любой степени сложности