какие красители применяют в микробиологической практике

Какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

био запись закреплена

19 ВОПРОС ОТЛИЧИЕ ПРОСТЫХ МЕТОДОВ ОКРАСКИ ОТ СЛОЖНЫХ.КАКИЕ КРАСИТЕЛИ ПРИМЕНЯЮТ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

При простых методах окраски используется лишь одна краска.

С этой целью в бактериологии используются, как правило, или водный фуксин или метиленовая синька. Простые методы окраски используются для ориентировочной, предварительной, микроскопии – определения наличия в патологическом материале бактерий, определение их формы и расположения в мазке.

При сложных методах окраски используются ряд красок в определенной последовательности. Такие методы используются для выявления в патологическом материале конкретных микроорганизмов, а также определения особенностей их ультраструктуры.

1. Окраска по Граму используется для определения типа строения клеточной стенки. Это основной метод в бактериологии. В зависимости от окраски по Грамму все бактерии подразделяются на грампо-ложительные и грамотрицательные.
2. Окраска по Цилю-Нильсену используется для выявления кислотоустойчивых бактерий (а именно – микобактерий), а также для обнаружения спор.
3. Окраска по Нейссеру используется для выявления цитоплазматических включений волютина и идентификации по их наличию коринебактерий (в частности – возбудителей дифтерии).
4. Окраска по Бури-Гинсу используется для выявления макрокапсул.
5. Окраска по Морозову используется для выявления жгутиков. Этот метод окраски используется также для выявления трепонем. Кроме того, окраску по Морозову используют в вирусологии – для выявления в оспенных пузырьках вирусов натуральной и ветряной оспы.
6. Окраска по Здрадовскому используется для выявления риккетсий и хламидий.
7. Окраска по Романовскому-Гимзе также, наряду с окраской по Здрадовскому, используется для вы-явления риккетсий и хламидий; кроме того, этот метод окраски используется для выявления спирохет (с их идентификацией до рода в зависимости от цвета окрашивания), а также для выявления простейших.

Источник

Методы окраски мазков и красители, используемые в микробиологии.

Существуют простые и сложные методы окраски. При простой окраске используют какой-либо один из красителей, например, фуксин водный (1-2 мин.), метиленовый синий (3-5 мин.). При окрашивании мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. После истечения времени окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют излишки воды, высушивают на воздухе и микроскопируют.

При сложной окраске последовательно наносятся на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Таковы методы окраски по Грамму, по Цилю-Нильсену, окраска спор по методу Ожешки.

В микробиологической практике кислые и основные красители используются в виде солей, так как они способны вступать в реакцию с кислотами и основаниями. Основные красители чаще применяются в виде солей соляной, реже уксусной и серной кислот; кислые красители – в виде натриевых или калийных солей.

Красители основной природы

Красные Фиолетовые

нейтральный красный генциан фиолетовый

пиронин кристаллический фиолетовый

сафранин метиловый фиолетовый

фуксин метиловый зеленый

гематоксилин малахитовый зеленый

Синие Коричневые

метиленовый синий хризоидин.

Зеленые Черный

янус зеленый индулин

Красители кислой природы

Красные и розовые Черные Желтые

кислый фуксин нигрозин конго

эритрозин пикриновая кислота

Интенсивность окрашивающей способности красителя завистит от рН среды: основные красители окрашивают объект тем интенсивнее, чем более щелочная среда, кислые – чем более кислая.

Красители можно разделить на: позитивные и негативные. Позитивные красители окрашивают непосредственно клетки микроорганизмов. Они окрашивают клетки при комнатной температуре в течение 30-60 секунд. Негативные красители окрашивают пространство, окружающее клетки микроорганизмов. В результате клетки выглядят силуэтами на фоне красителя.

Простой метод окраски

На приготовленный и фиксированный мазок нанести несколько капель водного раствора фуксина. Окрашивать 1-2 мин. Смыть краску водой, промокнуть препарат фильтровальной бумагой, досушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска по методу Грама.

1. На фиксированный мазок нанести карболово – спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1 –2 мин бумагу снять, а краситель слить.

2. Нанести раствор Люголя на 1 –2 мин.

3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30 –60с до прекращения отхождения фиолетовых структур красителя.

5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1- 2 мин., промыть водой, высушить фильторовальной бумагой и на воздухе, и микроскопировать.

Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшиеся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Это зависит от различий в химическом составе и проницаемости клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий пептидогликан многослоен, с ним связаны тейхоевые кислоты.

У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослоен, имеется наружная мембрана, в состав которой входят фосфолипиды, липопротеиды, белки и сложный мепополисахарид (ЛПС). Всю наружную мембрану пронизывают белки – порины, обеспечивающие диффузию различных соединений. Таким образом, у граммположительных бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и резистентности к обесцвечиванию спиртом.

К грамположительным бактериям относятся старилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным – гонококки, менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерии могут окрашиваться по Грамму вариабельно, в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов, воздействующих на структуру клеточной стенки. Поэтому для окраски нужно брать всегда молодые, 1- суточные культуры.

Основная ошибка, допускаемая при окраске по Грамму, состоит в “переобесцвечивании” мазка этиловым спиртом. Грамположительные бактерии при этом могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грамотрицательных бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином грамотрицательные бактерии в свою очередь могут сохранять сине–фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания.

Контрольные вопросы

1. Методы приготовления прижизненных препаратов.

2. Из каких этапов состоит приготовление окрашенного препарата?

3. Методы окраски мазков.

4. Методика окраски по методу Грама.

5. Красители основной природы.

6. Красители кислой природы.

Рекомендованный материал

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под редакцией Егорова Н.С. МГУ. М., 1995. Стр. 98-101, 104- 116.

2. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. МГУ. М., 1985. Стр. 24-29.

3. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр.27-30.

ЗАНЯТИЕ 3

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Источник

Краски, применяемые в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть фото какие красители применяют в микробиологической практике. Смотреть картинку какие красители применяют в микробиологической практике. Картинка про какие красители применяют в микробиологической практике. Фото какие красители применяют в микробиологической практике

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №2

Тема: Строение и химический состав бактериальной клетки. L-формы бактерий, возбудителей заболеваний человека. Тинкториальные свойства бактерий, окраска по методу Грама и другие сложные методы окраски.

Цель: Изучить строение клеточной стенки микроорганизмов. Освоить сложные методы окраски для выявления отдельных органоидов бактериальной клетки.

Знать:

· Строение клеточной стенки бактерий. Химический состав и функциональное назначение.

· Особенности строения и химического состава клеточной стенки у грамположительных и грамотрицательных бактерий.

· L-формы бактерий. Особенности оболочки этих форм бактерий. Факторы, которые влияют на образование протопластов и сферопластов.

· Этапы окраски по Граму.

· Механизм дифференциальной окраски по Граму.

· Капсула и ее биологическая роль для бактериальной клетки. Химический состав капсулы.

· Внутриклеточные включения. Биологическая роль в жизнедеятельности бактерий. Методы выявления.

· Биологическое значение спор и условия их образования.

· Чем обусловлена термоустойчивость спор?

· Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.

· Уметь проводить дифференциацию бактерий по тинкториальным свойствам.

· Владеть техникой контрастирования капсул у бактерий по Бурри-Гинсу.

· Овладеть техникой изготовления мазка из агаровых культур бактерий.

· Приготовить препарат и окрасить его с целью выявления спор в культуре микроорганизмов.

· Уметь окрасить препарат для дифференциальной окраски по Граму.

· Выявить наличие жгутиков в культуре с помощью метода Леффлера.

· Какие компоненты составляют оболочку бактерий, какой из них определяет тинкториальные свойства бактерий?

· Каковы методики окраски микроорганизмов сложными методами окраски?

· В чем сущность окраски по Граму?

· Как контролируется правильность окраски по Граму?

· Кислотоустойчивые бактерии. Особенности химического состава клеточной стенки.

· Споры у бактерий. Их биологическое значение и условия образования.

· Методы выявления кислотоустойчивых бактерий и спор.

· Морфология микоплазм. Особенности ультраструктуры.

· Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.

Краски, применяемые в микробиологической практике

Для окрашивания микроорганизмов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь и др. Наиболее часто употребляемыми красителями являются следующие:

синие — метиловый синий, водный синий, опаловый синий;

красные — фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный, фуксин кислый;

Источник

Какие красители применяют в микробиологической практике

Для того чтобы увидеть четкие контуры микроорганизмов, применяют метод биологического окрашивания. Специальные методы окраски позволяют выявить морфологию и структуру микробных клеток. В микробиологии используют различные красители, которые разделяются по их способности окрашивать определенные структурные образования микробных клеток.

СОСТАВ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Приготовление насыщенных спиртовых растворов красителей. Порошки в количествах, необходимых для приготовления каждого красителя, высыпают во флаконы, заливают 96% этиловым спиртом и ставят на 18-24 ч в термостат при 37°С, периодически взбалтывая. В течение указанного времени значительная часть красителя растворяется, и на дне флакона остается небольшой осадок, свидетельствующий о насыщении раствора. Насыщенные растворы могут храниться долгое время во флаконах из темного стекла.

Приготовление спиртово-водных растворов красителей. Спиртово-водные растворы красителей готовят из насыщенных спиртовых растворов. Для этого насыщенный спиртовой раствор красителя смешивают в различных соотношения, (в зависимости от красителя) с дистиллированной водой.

Кристаллический фиолетовый

Вместо кристаллического фиолетового можно пользоваться генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

1 мл насыщенного спиртового раствора разбавляют 10 мл дистиллированной воды.

Карболовый раствор кристаллического генцианового или метилового фиолетового готовят аналогично первой прописи карболового раствора фуксина Циля (описано ниже) или смешивают 10 мл насыщенного спиртового раствора краски со 100 мл карболовой кислоты. Полученную смесь тщательно взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. Растворы кристаллического метилового, генцианового фиолетового нестойки, готовить их в большом количестве на длительное хранение не рекомендуется.

Г. Кристаллический фиолетовый ацетат.

Приготовленную смесь тщательно взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. Вместо кристаллического фиолетового можно использовать насыщенный раствор метилового фиолетового. Краситель нестойкий, хранится не более месяца во флаконе темного стекла.

Фуксин

1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина разбавляют 10 мл дистиллированной воды.

Вариант 1. 1 г основного кристаллического фуксина растереть в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавить спирт. После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании небольшими порциями 100 мл дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля очень стойкий и достаточно хорошо сохраняется длительное время во флаконе темного стекла с притертой пробкой.

Вариант 2. К 10 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина приливают 90 мл 5% карболовой кислоты (карболовую кислоту вливают в краситель, но не наоборот). Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают, фильтруют через бумажный фильтр, а затем выливают во флакон для хранения. Этот краситель в чистом виде используется только для окраски кислотоустойчивых бактерий и спор.

Г. Фуксин спиртово-водный Пфейффера (раствор Пфейффера).

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды, в течение нескольких минут раствор необходимо энергично встряхивать. Раствор очень нестойкий, его необходимо готовить в небольших количествах непосредственно перед использованием. Оставлять можно не дольше следующего дня.

Метиленовый синий

1 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего разбавляют 30 мл дистиллированной воды.

В. Метиленовый синий по Леффлеру.

Насыщенный 8% раствор метиленового синего фильтруют через бумажный фильтр, прибавляют раствор едкого калия и разбавляют дистиллированной водой. Раствор красителя может храниться во флаконе в течение длительного времени, не изменяя свойств. При хранении его красящая способность, а также свойство давать метахроматическое окрашивание нуклеиновых соединений повышаются за счет образования азуров.

Готовят отдельно два основных раствора.

Непосредственно перед окраской зерен волютина смешивают 2 части первого раствора с 1 частью второго раствора.

В воронку на бумажный фильтр насыпают отвешенное количество краски, после чего вливают кипящую воду.

Везувин (коричневый краситель)

Все ингредиенты смешать, нагреть до кипения на слабом огне и после остывания профильтровать через бумажный фильтр.

Сафранин

Сафранин отвешивают в заданном количестве, ссыпают в воронку с бумажным фильтром и заливают кипящей водой.

Бриллиантового зеленого спиртовый раствор

Краска хранится длительное время во флаконе темного стека в темноте, закрытая стеклянной притертой или резиновой пробкой.

Краситель Романовского-Гимзы

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского-Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации.

Приготовление красителя иногда занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 95% этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Краситель Романовского-Гимзы представляет собой смесь азура (органический краситель, получаемый из метиленового синего), эозина и метиленового синего. Продается в готовом виде. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды (pH 7,0-7,2) прибавляют 10 капель имеющегося в продаже красителя Романовского-Гимзы.

Тушь для окраски препаратов по Бурри

К 1 объему черной туши прибавляют 3 объема дистиллированной воды. Разведенную тушь наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15-20 минут при 2000-3000 об./мин для осаждения крупных частиц туши. Сливают надосадочный слой туши и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. в течение 30 минут. Вместо стерилизации можно добавлять к туши несколько капель формалина. Подготовленную таким образом тушь выдерживают две недели, пока все крупные частицы не осядут на дно. Для приготовления препарата осторожно берут только верхнюю часть отстоявшейся жидкости.

Реактив Г. П. Калины

0,5% раствор йодида калия готовят, подогревая на водяной бане. После полного растворения навески йодида калия в 96% этиловом спирте последний соединяют с растворами фуксина и йода. Смесь хранят во флаконе темного стекла с притертой пробкой в холодильнике.

Раствор Люголя

Йодид калия растворяют в 5-10 мл дистиллированной воды, затем прибавляют кристаллический йод, оставляют на несколько часов до полного его растворения и после этого приливают остальное количество воды.

Краситель Козлова (для выявления зернистых форм микобактерий туберкулеза)

Генцианвиолет и фенол растирают в ступке, добавляя постепенно глицерин и дистиллированную воду. Перед употреблением основной раствор разводят 3 частями дистиллированной воды и фильтруют.

Краситель Раскиной для окраски зерен волютина

РАСТВОРЫ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КРАСЯЩИХ БУМАЖЕК

Кристаллический генциановый или метиловый фиолетовый для окраски по Граму

Фуксин (основной)

Фуксин карболовый Циля

На 100 мл приготовленного красителя добавляют 1-2 мл глицерина.

Метиленовый синий

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ

Для приготовления препарата из микробов, выросших на жидкой среде, исследуемый материал берут из пробирки бактериологической петлей.

1) предметное стекло;

2) пробирка с культурой бактерий, выросших в жидкой питательной среде;

3) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

1. Обжечь петлю в пламени спиртовки до покраснения.

2. Вытащить ватную пробку из пробирки правой рукой (мизинцем), обжечь ее края над пламенем спиртовки.

3. Внести петлю в пробирку с МПБ, охладить петлю о внутреннюю поверхность стекла, затем взять 1 каплю культуры.

4. Обжечь края пробирки и пробку, закрыть пробирку, поставить ее в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом).

5. Обезжиренное, обожженное в пламени спиртовки и охлажденное предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку.

6. Бактериологической петлей материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности предметного стекла в виде круга диаметром 8-10 мм.

7. Петлю обжечь в пламени спиртовки до покраснения.

8. Препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить.

Мазки должны содержать достаточно материала для исследования и не быть толстыми.

1) предметное стекло;

2) вода или изотонический раствор хлорида натрия;

3) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной питательной среде;

4) бактериологическая петля;

1. На обезжиренное предметное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора.

2. С поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом культуры: скошенной поверхностью кверху), бактериологической петлей осторожно взять материал.

3. Обжечь края пробирки, закрыть пробкой, поставить в штатив, не выпуская из рук бактериологическую петлю с культурой.

4. Внести материал бактериологической петлей в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала.

5. Высушить препарат на воздухе.

6. Излишек микробного материала на петле сжечь в пламени спиртовки.

7. Фиксировать препарат фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.

Приготовление препарата из клинического материала. Приготовление препарата из крови. На хорошо обезжиренное предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносят каплю крови, прикасаясь узким концом стекла непосредственно к уколу на пальце. Второе шлифованное стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и одинаковую толщину на всем своем протяжении.

Приготовление «толстой капли». На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле крови, выступающей из пальца. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериологической петлей до размера 8-10 мм в диаметре. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление препарата из жидкого патологического материала (мочи, ликвора). Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром 8-10 мм.

Приготовление препарата из вязкого материала (мокрота, гной). Мокроту или гной переносят на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг к другу, в результате чего находящийся между ними материал раздавливается. После этого свободные концы стекол захватывают большим и указательным пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу.

Приготовление препарата из органов и тканей. При исследовании органа, имеющего рыхлую консистенцию, его поверхность прижигают накаленными браншами пинцета (для обеззараживания), делают по этому месту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты.

Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный материал распределяют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Приготовление препарата из нативного ликвора. Нативный ликвор центрифугируют при 3000 об./мин 5-10 минут. Из осадка отбирают каплю ликвора и наносят на обезжиренное предметное стекло. Препарат высушивают на воздухе при комнатной температуре или в условиях термостата при 37°С.

ФИКСИРОВАНИЕ ПРЕПАРАТОВ

Фиксация необходима для инактивации бактерий и прикрепления (фиксации) их к стеклу, предотвращения аутолизиса клеток и улучшения восприятия красителя.

Самым распространенным методом фиксации бактерий считается обработка жаром. Это осуществляется путем трехкратного проведения препарата мазком вверх над пламенем спиртовки или газовой горелки. Препарат может находиться в пламени спиртовки не более 3 секунд. Для проверки надежности фиксации свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной стороне левой кисти. При правильном фиксировании стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущений ожога. После чего препараты из бактерий окрашиваются разными способами. Метод применим при работе с чистой культурой микробов. При фиксации жаром удовлетворительной остается форма тела бактерий, но размеры их сохраняются хуже вследствие сморщивания клеток. Что же касается клеточных включений и других структур, то жаром можно фиксировать волютиновые зерна и эндогенные споры (для грубого исследования). Фиксацию жаром нельзя применять для жгутиков, протоплазмы и ядра, препаратов крови и отпечатков органов.

Фиксация химическими веществами используется для выявления и дифференциации структурных элементов: жгутиков, протоплазмы, нуклеоида, оболочки, при работе со смешанным материалом (кровь, отпечатки органов, соскобы со слизистых, гной, мокрота).

В качестве фиксаторов применяют:

• метиловый спирт (фиксируют 5 минут);

• этиловый спирт 96% (фиксируют 10-20 минут);

• смесь Никифорова: равные объемы спирта и эфира (фиксируют 10-20 минут);

• ацетон (фиксируют 5 минут);

Существует два метода химической фиксации мазков:

1. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в банку с фиксатором, высушивают на воздухе и микроскопируют.

2. На горизонтально установленные предметные стекла с мазками наносят по капле фиксатор и дают высохнуть.

Время фиксации зависит от применяемых в качестве фиксаторов веществ.

Наш сайт не претендует на авторство размещенных материалов. Мы только конвертируем в удобный формат материалы, которые находятся в открытом доступе и присланные нашими посетителями.

Если вы являетесь обладателем авторского права на любой размещенный у нас материал и намерены удалить его или получить ссылки на место коммерческого размещения материалов, обратитесь для согласования к администратору сайта.

Разрешается копировать материалы с обязательной гипертекстовой ссылкой на сайт, будьте благодарными мы затратили много усилий чтобы привести информацию в удобный вид.

© 2018-2021 Все права на дизайн сайта принадлежат С.Є.А.

Источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *